检查分光光度计的波长精度及重现性
背景
分光光度计是生物化学实验室中常用的仪器之一,用于测量分子的吸光度。在分光光度计的使用过程中,波长精度和重现性是两个重要的参数。波长精度指的是分光光度计的读数与设定波长的偏差,而重现性是指同一波长下的多次测量结果的可重复性。本文探讨了如何检查分光光度计的波长精度及重现性。
波长精度的检查方法
波长精度的检查方法简单,可用不同浓度的溶液进行校准。一般来说,优质的分光光度计的波长误差应该在0.2 nm以下。为了准确地检查波长精度,可以按照以下步骤进行操作:
1. 选取一种标准样品,比如说铜离子,根据其吸收峰的位置确定波长。
2. 将不同浓度的铜离子样品分别放入分光光度计中,读取各样品吸光度。
3. 以吸光度最大的样品为基准样,计算其他样品在基准波长下的吸光度。并绘制吸光度-波长曲线。
4. 检查铜离子样品吸光度最大的波长与设定波长是否一致,若一致则说明分光光度计的波长精度良好。
重现性的检查方法
重现性的检查方法需要多次测量样品吸光度,计算各次测量结果的平均值和标准差。在此过程中,样品应保持稳定,并避免在操作中对样品造成干扰。以下是具体的操作步骤:
1. 用同一个样品,按照相同的条件。取多次,例如取5次,记录每次的吸光度值。
2. 计算各次测量结果的平均值和标准差。计算公式:
平均值 = (吸光度1 + 吸光度2 + ... + 吸光度5) / 5
标准差 = [(吸光度1-平均值)^2 + (吸光度2-平均值)^2 + ... + (吸光度5-平均值)^2] / 4
3. 如果计算出的标准差较小,则说明分光光度计的重现性良好。
通过实验,我们可以检查分光光度计的波长精度和重现性。在使用分光光度计时,我们需要定期检查它的波长精度和重现性,以确保其准确性和可靠性。通过这种检查,我们可以提高实验的精度和可重复性,保证实验结果的准确性。
参考文献:
1. 薛凌涛等. 农药分析技术[M]. 北京: 科学出版社, 2006.
2. Miernik A, Eilers Y, Bolenz C, et al. Validation of the new high-precision spectrophotometric measurement system UVISELFINESSE for determination of oral specific drugs[J]. Analytical chemistry, 2007, 79(9): 3409-3415.